1 클로닝이란? 1 1.1 클로닝의 정의 2 1.2 새로운 유전자의 발굴 3 1.3 과거의 클로닝 5 1.4 현재의 클로닝 6 2 클로닝을 위한 준비 9 2.1 클로닝 설계에 유용한 소프트웨어 10 2.2 벡터, 플라스미드, 컨스트럭트 & 코작 염기서열(Kozak consensus sequence) 13 2.3 MCS(Multiple Cloning Site) 18 2.4 제한효소(Restriction Enzyme, RE)와 스타활성(star activity) 22 2.5 아가로즈 젤 전기영동을 이용한 DNA 분석 29 2.6 LB(Luria-Bertani) 플레이트 만들기 34 2.7 Competent Cell 37 2.8 DNA의 질량을 mole 수로 바꾸는 법 41 2.9 새로운 플라스미드를 받았을 때 42 2.10 cDNA 라이브러리 44 3 클로닝 첫걸음 47 3.1 Cut & Paste 48 3.2 DNA 염기서열분석 & direct 염기서열분석 61 3.3 클로닝을 위한 PCR & nested PCR 65 3.4 Fill-in(Full & Partial) 77 3.5 상보적인 점착말단(Compatible Cohesive End) 83 3.6 메틸화(Methylation) 85 3.7 세 절편 연결(Three-piece ligation) 93 3.8 위치지정 돌연변이(Site-directed mutagenesis) 96 3.9 TA 클로닝 & T-벡터의 제작 102 3.10 TOPO TA 클로닝 108 3.11 Gateway 클로닝 110 3.12 식물 형질전환(Plant transformation) 벡터의 구조 114 3.13 Rhizobium radiobacter 형질전환 117 4 클로닝 다음 걸음 119 4.1 유전자 중간 부분에 다른 DNA를 삽입(insertion)하는 방법 120 4.2 유전자 중간 부분을 삭제(deletion)하는 방법 124 4.3 유전자에 에피톱 택을 삽입하는 방법 & CRISPR/Cas9 126 4.4 번역융합(Translational Fusion) vs 전사융합(Transcriptional Fusion) 133 5 클로닝으로 인한 두통을 덜어주는 방법 135 5.1 Golden gate assembly & Golden gate를 이용해 푸는 직소퍼즐 136 5.2 In-Fusion SLIC(In-Fusion Sequence-and Ligation-Independent Cloning) 142 5.3?? T4 DNA Pol SLIC (T4 DNA Polymerase Sequence-and Ligation-Independent Cloning) 153 5.4 RE-free SLIC 159 5.5 EMP(Exponential Megapriming PCR) 클로닝 161 5.6 MRF(Modified Restriction Free) 클로닝 165 5.7 Non-template PCR 클로닝 168 5.8 cDNA 합성 의뢰 171 6 클로닝 마지막 걸음 173 6.1 다른 종에서 유사한 유전자(homolog)를 클로닝하는 방법 174 6.2 RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends) 178 6.3 BAC 재조합 181 6.4 Old Trick: 부분절단 185 6.5 벡터의 변경 187 6.6 클로닝이 다 됐다고 생각했는데 틀이동 돌연변이가 있을 때 191 6.7 클로닝의 실제: 억세게 운이 없는 경우 193 7 클로너에게 주는 조언 205 7.1 클로닝이 안 될 때 206 7.2 클로닝의 정리와 기록 209 심화학습을 위한 문헌 213 약자 215 찾아보기 217